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大鼠抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)酶联免疫分析

阅读人数:309 发布时间:2019/7/5 13:49:11

 本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:                                                          96T
15 ng/L - 400ng/L
 
使用目的: 本 试 剂 盒 用 于 测 定 大 鼠 血 清 、 血 浆 及 相 关 液 体 样 本 中 抗 血 小 板 抗 体 IgG/M/A(PA-IgG/M/A)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中大鼠抗血小板抗体 IgG/M/A(PA-IgG/M/A)水平。 用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入抗血小板抗体 IgG/M/A(PA-IgG/M/A),再与 HRP 标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过 彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化 成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗血小板抗体 IgG/M/A(PA-IgG/M/A)呈正相关。用酶 标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠抗血小板抗体 IgG/M/A(PA-IgG/M/A)浓度。  试剂盒组成  1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶 2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(800 ng/L) 0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张   6 显色剂 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个 标本要求  1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 400ng/L 5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液 200ng/L 4 号标准品 150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 100ng/L 3 号标准品 150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 50ng/L 2 号标准品 150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 25ng/L 1 号标准品 150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
 
 
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl, 然后再加待测样品 10µl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。    4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。  7. 温育:操作同 3。 8. 洗涤:操作同 5。 9. 显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15 分钟. 10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。 操作程序总结:
 
 
计算   以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。  注意事项 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值 大于标准品孔孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计 算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1.试剂盒保存: ;2-8℃。 2.有效期:6 个月

原创作者:上海瑞番生物科技有限公司

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