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人寨卡病毒(Zika Virus)阳性判定

阅读人数:74 发布时间:2020/3/16 17:16:10

 人寨卡病毒(Zika Virus酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

                                                                     96T

 

使用目的:

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中寨卡病毒(Zika Virus)表达

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本寨卡病毒(Zika Virus)表达。用纯化的寨卡病毒(Zika Virus)抗体包被微孔板,制成固相抗可与样品中寨卡病毒(Zika Virus相结合经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的寨卡病毒(Zika Virus)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中人寨卡病毒(Zika Virus的存在与否。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1

7

终止液

6ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

8

阳性对照

0.5ml×1

3

标包被

12孔×8

9

阴性对照

0.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

1

5

显色剂A

6ml×1

11

封板膜

2张  

6

显色剂B

6ml×1/

12

密封袋

1

标本要求 

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟   

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外

7. 温育:操作同3

8. 洗涤:操作同5

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

计算和结果判定:

  试验有效性:阳性对照孔平均值1.00; 阴性对照平均值0.20

  临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

  阴性判定:样品OD< 临界值(CUT OFF)者为寨卡病毒(Zika Virus阴性

  阳性判定:样品OD 临界值(CUT OFF)者为寨卡病毒(Zika Virus阳性

注意事项

1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

3浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm

7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。

保存条件及有效期

1试剂盒保存:2-8

2.有效期:6个月

 

原创作者:上海瑞番生物科技有限公司

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